Differenza tra clonazione e subclonazione | Clonazione vs Subcloning

Differenza chiave - Clonazione vs Subcloning

La clonazione e il sottoclonaggio sono procedure biologiche molecolari che creano cellule o organismi geneticamente identici che recano il DNA o il gene che sono di interesse. La clonazione è una tecnica che prevede l'inserimento del gene o del DNA interessato in un vettore, la sua replicazione all'interno di un batterio ospite e la produzione di cellule o organismi che sono esatte copie del trucco genetico. La subclonazione è una tecnica che prevede l'inserimento del gene di interesse, già inserito in un vettore, in un vettore secondario, la sua replica all'interno di un batterio ospite e la produzione di copie geneticamente identiche di cellule o organismi. La differenza fondamentale tra la clonazione e il subcloning è che, in clonazione, il gene di interesse, una volta legato in un vettore, continua il processo di clonazione mentre, nel subclonaggio, il gene già interessato di clonazione viene separato dal vettore padre e inserito nuovamente in un vettore destinatario e proseguire il processo .

SOMMARIO

1. Panoramica e differenza chiave

2. Che cosa è Clonazione

3. Che cosa è il subcloning

4. Confronto Side By Side - Clonazione vs Subcloning

5. Sommario

Che cosa è Clonazione?

La clonazione è la procedura che produce organismi o cellule geneticamente identiche. Nella natura, la clonazione avviene nei mezzi di riproduzione asessuale. Quando non vi è alcuna ricombinazione o alterazione genetica, le cellule figlia ricevono lo stesso trucco genetico del genitore. Gli organismi procarotici e eucariotici creano cloni di fissione binaria, germogli, mitosi, ecc. Nella biologia molecolare, i geni di clonazione o frammenti specifici del DNA sono un metodo popolare per studiare la struttura e la funzione di quella particolare sezione del DNA.

L'obiettivo principale della clonazione molecolare è quello di realizzare milioni di copie di cellule o organismi geneticamente identici che recano il frammento di DNA interessato (soprattutto i geni). Crea organismi con esatte copie genetiche di un altro. In primo luogo, i geni specifici sono clonati in studi molecolari per ottenere informazioni strutturali e funzionali e per il sequenziamento del DNA. Inoltre, per la produzione di proteine ​​o prodotti specifici in larga scala, la clonazione è ampiamente utilizzata.

Procedura di clonazione

Le fasi di base della procedura di clonazione sono le seguenti.

Identificazione e isolamento del gene di interesse. (Amplificazione del gene di interesse mediante PCR).

La digestione di restrizione del gene di interesse (l'endonucleasi di restriction taglia il gene).

1. La digestione di restrizione del DNA vettoriale.(Il DNA vettoriale viene anche tagliato usando la stessa endonucleasi di restrizione).
2. Inserimento del gene nel vettore e nella formazione della molecola ricombinante.
3. Trasformazione del vettore ricombinante in un batterio ospitante.
4. Isolamento e identificazione dei batteri trasformati (il vettore del plasmide dovrebbe contenere un gene selectable, più comunemente un gene di resistenza agli antibiotici per trasformare i batteri trasformati).
5. Espressione genica ricombinante all'interno dell'host.
6. Figura_01: Procedura di clonazione
7. Che cos'è il subcloning?

Il subcloning è una procedura di spostamento di un gene di interesse da un vettore ad un altro vettore per vedere l'espressione del gene per ottenere la funzionalità desiderata del gene. In questo metodo sono coinvolti due vettori; vale a dire, il vettore principale e il vettore di destinazione. Gli inserti clonati vengono spostati nuovamente in un secondo vettore nel subcloning. L'obiettivo di trasferire il gene dal primo vettore al secondo vettore è quello di ottenere qualcosa che non potrebbe essere fatto dal primo vettore o di separare nuovamente un gene all'interno del frammento già già clonato del DNA e di esprimerlo da solo. Gli enzimi di restrizione vengono utilizzati in questa procedura all'inizio.

Procedura di subcloning

I passaggi di base del subcloning sono i seguenti.

Con l'aiuto di endonucleasi di restrizione, la separazione del DNA di interesse nel plasmide donatore (vettore genitore).

Amplificazione del DNA di interesse utilizzando PCR.

1. Purificazione del prodotto PCR (DNA di interesse) mediante elettroforesi a gel.
2. Apertura del plasmide destinatario con le stesse endonucleasi di restrizione utilizzate per separare il DNA di interesse nel plasmide genitore.
3. Ligation del DNA di interesse (gene) nel plasmide destinatario per creare il plasmide sottoclonato.
4. Trasformazione del vettore sottoclonato in un batterio ospitante competente.
5. Screening delle cellule trasformate.
6. Purificazione del DNA plasmidico e utilizzo per sequenziamento o espressione dei geni del DNA per ottenere i prodotti desiderati.
7. La subclonazione viene effettuata in occasione dell'isolamento di un gene dal gruppo clonato di geni o quando il gene di interesse è necessario per trasferire in un plasmide utile per vedere l'esatta funzione del gene di interesse.
8. Figura_02: Procedura di subcloning

Qual è la differenza tra Clonazione e Subcloning?

- clonazione vs sottoclonaggio

La clonazione è la procedura che produce organismi o cellule geneticamente identiche.

Il subcloning è una procedura di spostamento di un gene di interesse da un vettore ad un altro vettore per vedere l'espressione del gene per ottenere la funzionalità desiderata del gene.

Processo
Separa il DNA di interesse dall'organismo e inserito in un vettore una volta e clonato	Il DNA già clonato viene separato dal primo vettore e inserito in un secondo vettore e clonato.
Inserisci movimento tramite vettori
Non sposta gli inserti (DNA di interesse) da un vettore a un altro vettore.	Spostare gli inserti dal vettore genitore al vettore di destinazione.
Sommario - Clonazione vs Subcloning
La clonazione crea cellule o organismi geneticamente identici con il gene inserito o DNA di interesse.Si procede attraverso la separazione e l'inserimento del DNA di interesse in un vettore ed espressione all'interno di un batterio ospitante. Il subcloning condivide azioni simili con la clonazione. Tuttavia, nel subclonaggio, il frammento di DNA già clonato (gene di interesse) viene inserito in un vettore e trasformato in un batterio ospitante. Questa è la differenza fondamentale tra la clonazione e il subcloning.	Riferimenti

Lodish, Harvey. "Clonazione del DNA con vettori plasmidi. "Biologia delle cellule molecolari. 4a edizione. U. S. National Library of Medicine, 01 gennaio 1970. Web. 05 marzo 2017

"Subcloning. "Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 febbraio 2017. Web. 06 marzo 2017

"Subcloning. "Subcloning" Articoli di Open Access Riviste Open Access | Progetti di Conferenza | Editori | Autori | Recensori | eventi scientifici. N. p., n. d. Web. 06 marzo 2017

1. Wackerhage, Henning. "Come subclone. "Come subclone. N. p., 01 gennaio 1970. Web. 06 Mar. 2017
2. Immagine per gentile concessione
3. Procedura di clonazione molecolare - Da CNX OpenStax [CC BY 4. 0], tramite Wikimedia Commons
4. Procedura di subcloning - Dall'attore originale è stato Takometer in Wikipedia in inglese (trasferito da en. wikipedia in Commons.) [CC BY 2. 5], tramite Wikimedia Commons